大肠杆菌培养

大肠杆菌培养

大肠杆菌是我们肠道里面的杆菌，这是一种很常见的杆菌，对于我们人体的健康是可谓是一把双刃剑，在不致病的情况下(正常状况下)，可认为是互利共生(一般高中阶段认为是这种关系);

在致病的情况下，可认为是寄生，而致病的话常常容易导致严重的腹泻和败血症，那么，大肠杆菌培养是怎么回事?

针对这个问题我们来详细了解吧!

大肠杆菌培养 需37°恒温过夜培养

大肠杆菌的培养

1. LB培养基配制：

(液体培养基)

① 取1L的烧杯，加入适量的一蒸水(<1000ml)，称取胰蛋白胨 10g , 酵母提取物 5g , Nacl 10 g 倒入烧杯中

② 加入磁子搅拌，至完全溶解

③ 用NaoH调PH=7.0，定容至1L

④ 分装后高压蒸汽灭菌

(固体培养基)

① 在液体培养基的基础上加入琼脂糖：1L液体培养基→15g琼脂糖(用水先溶解)

② 在电炉子上边加热边搅拌至煮沸溶解

③ 分装后高压灭菌

注意事项：

① 电炉子温度不要太高，烧杯直接加热时电炉子上要加石棉网

高压灭菌时，瓶盖上要插上针头，防止灭菌时瓶盖喷出

2. 倒平板：

培养皿要提前进行灭菌、烘干，在超净工作台里，打开酒精灯，在酒精灯的火焰旁进行操作，倒完后做好标记

3. 接种(平板划线分离法)：

接种环挑取大肠杆菌进行接种：图式：

注意：每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。

4. 37°恒温培养箱培养：

接种好的培养皿正置15分钟，然后倒置放入培养箱过夜培养

大肠杆菌感受态的制备及转化

感受态：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。

转化：是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。

一、制备：步骤

从大肠杆菌DH5α的培养平板上挑取一个单菌落接于2mL

LB液体培养基的试管中，37℃振荡培养过夜。

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以1%的接种量将以上过夜培养物接种于液体培养基中

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37℃振荡培养2～3h

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将菌液转移到50mL离心管中，冰上放置10min

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4000rpm，离心10min回收细胞

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倒出培养液，将管倒置1min以便培养液流尽

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用冰冷的0.1mol/L CaCl 2 10mL，悬浮沉淀

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立即放在冰上保温30min

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4℃，4000rpm，离心10min，回收细胞

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用冰冷的0.1mol/L CaCl 2 2mL悬浮细胞(务必放冰上)

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分装细胞，每200μl一份。

此细胞为感受态细胞。

二、转化：步骤：

在200μl新鲜配制的感受态细胞中加入质粒 DNA2μl(≤50ng)，

混匀同时做以下对照管

(受体菌对照：200μl感受态细菌+2μl无菌水 质粒对照：200μl 0.1mol/L CaCl 2溶液+2μl质粒)

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冰上放置30min

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将管放到42℃循环水浴热冲击90s

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取出，迅速冰浴2min

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每管加800μl LB液体培养基，37℃慢摇复苏1h

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取50μl已转化的感受态细胞或对照样品， 各分别涂在含有或不含有氨苄青霉素的培养皿中

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待吸干菌液后，倒置培养皿，于37℃培养过夜

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次日在含氨苄青霉素的培养皿上长的菌落即为含有质粒的大肠杆菌(即转化成功)

【温馨提醒】：对于人体而言，当身体免疫力降低的时候，才比较容易感染到大肠杆菌这一病毒。大肠杆菌必须尽早治疗，以免日后给生命健康带来隐患。

（责编：付子颜 ）